3D细胞培养仪

LunaGel™ Extracellular Matrix
用于3D细胞和类器官培养的，3D细胞培养仪

可直接使用的光交联细胞外基质试剂盒

LunaCrosslinker™
可见光交联系统

1. 培养贴壁癌细胞（如肠癌、胃癌、肝癌）需要选择哪种试剂盒？培养悬浮生长的免疫细胞（如NK细胞、巨噬细胞）应该选择哪种试剂盒？

答：所有的LunaGel明胶试剂盒都适合培养贴壁癌细胞，是LunaGel猪皮明胶和LunaGel牛骨明胶。对于培养免疫细胞，建议使用LunaGel牛骨明胶，因为其内毒素水平比LunaGel猪皮明胶低很多。

近期会推出一种专门针对免疫细胞的新试剂盒，它使用超纯的明胶（没有内毒素）

2. 细胞样品需要预处理吗？如何预处理？

  答：不需要预处理。细胞从组织中提取，通过离心法制备颗粒，然后将细胞颗粒重新悬浮在LunaGel溶液中，并用移液管将溶液送到孔板进行交联。

3  一个试剂盒可以合成多少ml凝胶？

  答：每盒10ml。

4.  固化后是否还需要浸入培养基维持生长？基质中是否含有生长因子？如何自己添加生长因子？

  答：光凝胶不含生长因子。如果需要添加，最好在细胞培养液中添加生长因子。

5. 将液态试剂-细胞混合物加入PDMS容器后再进行固化会影响交联过程吗？交联仪器对PDMS有什么影响吗？

 答：不会。

6. 凝胶中的孔隙有多大？培养基、细胞因子等液体可以流过吗？还是只能依靠扩散？我们希望液体可以穿过基质的孔隙，基质能否承受住流体剪切力？会被冲碎吗？细胞能在基质中拉伸和迁移吗？

  答：孔隙的大小取决于凝胶的硬度，在月交联剂中交联度越长，毛孔越小，凝胶变得越硬。然而，即使是非常硬的凝胶也会允许基质和细胞因子通过扩散顺利的通过凝胶，细胞存活率通常超过90-95%。这种凝胶可以承受流体剪切力而不会破裂，除非凝胶非常软（交联时间小于30秒在LunaCrosslinker中的光照）。凝胶被交联到大约1.2kpa的数（50秒交联），在没有破裂的情况下注入基质。

7.  由于我们希望收集基质中的细胞进行后续的ELISA或毒性、代谢组学测定，GC-MS等，所以问基质能否被降解？或者细胞能否被取出来用于后续实验？基质本身的成分是否会影响这些实验。

  答：是的，所有光凝胶基质都可以根据胶原酶制造商的说明书用胶原酶降解。我们会新出一款试剂盒，*优化和即用的LunaGel细胞释放试剂盒，它允许细胞在30分钟内从凝胶中回收，用于后续实验，而不会影响无菌状态。可以进行大多数标准分析：如毒性、代谢活性、免疫荧光、 Qrt-PCR等，不会降解凝胶。在这种情况下，将试剂（如Alamar Blue 等）直接加入凝胶样品的井中，并以与单层贴壁细胞相同的方式进行测量。如果对细胞内蛋白感兴趣，可以释放细胞/降解凝胶。，凝胶的组成并不是很重要，它们都会在胶原酶的作用下降解，除了透明质酸酶才能降解的LunaGel透明质酸试剂盒。

8.  如果进行免疫荧光拍摄需要在细胞样品与试剂盒混合前加入染料还是细胞可以在凝胶中被染色？“血管细胞形成毛细血管"3D荧光标记图怎么拍，是直接将标记好荧光的骨架放到共聚焦显微镜下拍摄吗？

  答：免疫荧光的方法与用于贴壁细胞培养的标准方法非常相似。但是，由于3D样本中的扩散较慢，因此需要延长孵化步骤。例如，按照我们的方法制作细胞凝胶，在介质中（基质）中培养（7天或者14天），然后固定它们（例如，用4%的多聚甲醛固定1小时），并将他们储存在4度的缓冲液（PBS）中，直到您准备好染色，对于染色，首*行封闭（5%BSA或者缓冲液中的血清），然后在封闭缓冲液清洗2-3次，每次60分钟，以清洗游离抗体。洗涤后，用DAP（如果需要）在阻挡缓冲液中加入辅料，孵化过夜。最后再洗2-3次，每次60分钟，并保存样品知道成像。

  是的，这张照片是在共聚焦显微镜下拍摄。

9.  Corning的356234、356235、356237、356230、356231、354248，这些产品和Gelomics一样吗？Corning的产品包装有5ml和 10ml，而Gel的只有1g，这个1g的凝胶组对应的Corning的产品用量是多少？

答：Corning的356234、356235、356237、356230、356231、354248都是相同材质的（matrigel），只是浓度和体积不同。Martrigel的直接替代品是Gelonomy  LunaGel 可光交联性细胞外基质（10ml）低硬度（所有猪、牛、鱼都可以使用），与LunaCrossLinker相结合。

GelMA更适合用于再生医学/3D打印，它是一种干燥的材（1g），但客户可以将其溶解在10-20ml的溶液里，具体取决于    使用者情况。如果溶解在10ml的溶液中，GelMA浓度较高（100mg/ml），材料会比浓度较低时（20ml体积，50mg/ml）更硬。

10.  有没有对应Corning货号的逐一替代品。

 答：不同的Corning货号产品其实都是同一产品的变体，只是浓度和体积不同。

12.  Corning的产品已经上市30年了，非常老的技术，他们没有月光凝胶的产品。

13.  目前在中国没有销售，但有国际客户

Terasaki Institute for Biomedical Innovation

寺崎生物创新研究所 洛杉矶

Prof Molly Stevens （Imperial College London）

英国帝国理工学院 Molly Stevens教授

我们最新的竞争对手分析，演出于2022年1月，确定了总    共21个已建立的，和12家初创公司。总部设在美国(60%)，欧洲(25%)和亚太地区地区(15%)。到目前为止最大的场份额由以下产品占据：

天然原产地，如Matrigel，

海藻酸盐、胶原蛋白等。

天然生物材料是一类

从以下位置提取的材质含有最di限度的组织或植物操纵。Matrigel，一款产品，由康宁公司制造，是一种自然界最hao的例子。生物材料一直是第一个在近30年前引入直到今天，市场仍然存在领xian的产品。一般来说，自然的生物材料提供了一种细胞外微环境，具有很高的生物活性，因此与细胞交互以指示它们来建造类似人类的组织。

然而，天然材料也承受着批次之间的显著变化，具有粘性，很难使用，通常会限制用户调整影响细胞行为的重要参数，如细胞外基质硬度。其他公司提供*合成的人造细胞外基质材料，如Q-Gel Bio的Q-Gel。它们提供了增强的重复性和可调性，但非常昂贵，并且缺乏天然基质的生物活性。另一方面，GelEconomics使用的是所谓的半合成材料。结合了两者的优点，这些天然衍生材料经过内部化学修饰，提供了合成材料的可调性和再现性，同时保留了天然材料的固有生物活性。

以下是我们竞争的三大企业，它们做得好和不好的是什么

我们的产品与竞争对手的产品相比如何的图表如下所示。

价值主张与竞争优势

总结为什么我们的产品更好。

世界各地的科学家和研究人员迫切需要更好的实验室模型系统，以克服与传统细胞培养和动物实验相关的问题。重要的是，这个问题的潜在解决方案不仅必须具有生物学意义，而且还必须易于使用，提供高水平的实验控制，具有可重复性，并以经济的价格克服进入障碍，成为用户日常工作流程的一部分。这正是Gelonomy的产品所提供的！

我们的价值主张如下图所示。

相比以前的产品和与之竞争的产品，LunaGelTM技术具有广泛的优势。如本文件前面几节所述，我们的半合成生物材料和交联剂技术的主要优势是：

-LunaGelTM光交联技术提供了最gao水平的实验控制，使研究人员能够将重要的细胞外基质特性调整到程度。我们是一家提供可以调整以匹配各种人体组织特性的公司，例如大脑、肝脏、乳房、前列腺、皮肤、软骨等等。

-LunaGelTM材料促进自然细胞-细胞外基质的相互作用，并提供生物学相关性，具有非凡的翻译价值。

--LunaGelTM是市场上最快的3D细胞培养分析方法。例如，创建3D培养只需不到15分钟，而市场领xian产品Matrigel(Corning)需要3-4个小时。

-由于交联性独立于天然生物材料形成水凝胶的固有能力(已知不同批次的水凝胶差别很大)，LunaGelTM提供了实验重复性。

-我们的即用型免优化套件和LunaCrosslinker设计极其简单，因此降低了科学家在没有3D细胞培养经验的情况下进入市场的门槛。

-由于LunaGel产品不需要冷却，而且粘度低于Matrigel等大多数天然生物材料，因此我们的技术与自动化实验室系统*兼容，从而实现了3D细胞培养方法的可扩展性。

下面是我们相对于市场领xian产品的竞争优势的高级图形比较和演示。

LunaCrosslinker™可见光交联系统