支原体检测

支原体简介
      支原体(Mycoplasma)，是大小介于细菌和病毒之间的一类无细胞壁的原核细胞微生物，他们是已知最小的自我复制的原核生物。支原体细胞能够透过一般滤膜（0.22μm），且形态存在差异，呈高度多形性，有球形、杆状、丝状、分枝状等多种。不能被革兰氏染色，但可在琼脂固体平板上形成“菌落"且可被甲基蓝染色。

      支原体以寄生和共生方式存活，部分可能导致动物、植物宿主的病变。对人致病的支原体主要有肺炎支原体、溶脲脲原体、人型支原体、生殖器支原体等。支原体是细胞污染物中比较常见的一种，细胞受支原体污染程度较轻时，不会表现出明显的症状，但一旦这种潜伏的污染爆发时，细胞会大量脱落，细胞培养液会变浑浊。原代细胞和传代细胞都可能遭受支原体污染，根据不同实验室的调查结果显示，有15%-80%的细胞被支原体污染，传代细胞的污染率高于原代细胞。
      尽管自然界中存在的支原体有120多种，但污染细胞的支原体主要有5种分别为：莱氏无胆甾原体、精氨suan支原体、口腔支原体、发酵支原体和猪鼻支原体，这5 种支原体占所有支原体污染的95%以上。支原体污染可能来自操作人员和细胞培养用原材料如血清和yi蛋白酶，也可能来自于本身已被污染的细胞系和毒种。细胞受支原体污染后，功能和活性都会受到影响，会带来不可靠的实验结果和不安全的细胞制品。因此，对细胞进行支原体检测十分关键。

支原体检测要求

     支原体检测属于监管要求的一部分，支原体检测方法在全球范围内的一些药典、法规和指导文件中均有说明。针对生物制药产品支原体检测的

检测指导方针包括以下内容：
•中国药典2020版三部：3301 支原体检查法
•欧洲药典 2.6.7：Mycoplasmas
•美国药典 <63>：Mycoplasma Tests
•日本药典18th版： Mycoplasma Testing for Cell Substrates used for
the Production of Biotechnological/Biological Products.

      必须证明用于生物制品生产的细胞基质不含外源因子，包括支原体。支原体污染检测必须在产品开发的各个阶段进行，包括原材料、细胞库(MCB+WCB+EOPC)、病毒种子库、未加工的收获液材料和最终产品。

支原体检测方法

     qPCR法是通过特异性的引物和荧光探针结合支原体靶基因，通过聚合酶链式反应扩增释放荧光基团并放大荧光信号的方式检测待测样本中是否含有支原体污染。 被污染的样本将出现S型扩增曲线。 PCR反应时间通常需要1-2小时。
Mycoplasma
Detection
培养法
指示细胞法
qPCR法
     培养法是通过将待检测样本直接接种到适用于支原体生长的琼脂培养基中培养，并通过显微镜检查支原体菌落来检测样品中是否存在支原体污染。培养法检测时间通常为28天。
     指示细胞法是使用Vero或NIH3T3细胞孵育支原体一周后，使用DNA结合荧光染料染色。在荧光显微镜下观察待测样本是否存在支原体污染。被污染的样品指示细胞表面和周围会出现明亮的荧光。

qPCR检测试剂盒

Mycoplasma
qPCR Kit
         LPM MycProbe支原体Real-Time PCR试剂盒是基于LPM（Lux Preserve Matrix）高灵敏荧光探针法自主研发的创新产品，能够对多种支原体进行快速、可靠检测。 满足《欧洲药典》第2.6.7章的支原体检测相关要
求，能够高度特异性检测肺炎支原体、口腔支原体、猪鼻支原体、发酵支原体等《欧洲药典》和《日本药典》规定的支原体亚型，检测数据可靠，检测灵敏度可达10 CFU/mL。

产品组成

特点

产品表现

康妍葆 MycProbe ⽀原体 Real-Time PCR 检测试剂盒（100 Reactions）
产品⽬录号： KYB-Q-001-C
产品描述：
MycProbe 支原体 Real-Time PCR 试剂盒是基于 LPM 高灵敏荧光探针法自主研发的创新产品，能够对多种支原体进行快速、可靠检测。经验证满足《欧洲药典》第 2.6.7 章的相关要求，能够高度特异性检测肺炎支原体、口腔支原体、猪鼻支原体、发酵支原体等《欧洲药典》和《日本药典》规定的支原体亚型，检测数据可靠，经验证对常见细菌和真菌不产生交叉反应，检测灵敏度可达 10 CFU/mL。
产品组成：